Jak Czytać Certyfikat Analityczny COA? Analiza HPLC i Spektrometria Mas

Certyfikat analityczny (Certificate of Analysis - COA) to podstawowy dokument potwierdzający tożsamość i czystość chemiczną odczynnika laboratoryjnego. W przypadku odczynników peptydowych najważniejszymi elementami COA są wyniki dwóch niezależnych metod instrumentalnych: RP-HPLC oraz Spektrometrii Mas (MS).

1. Chromatografia Cieczowa RP-HPLC: Pomiar Czystości

Wysokosprawna chromatografia cieczowa w odwróconych fazach (Reversed-Phase HPLC) rozdziela związki na podstawie ich hydrofobowości. Kluczowe elementy chromatogramu:

• Czas retencji (Retention Time - tR): Czas od momentu wstrzyknięcia próbki na kolumnę do osiągnięcia maksimum sygnału piku głównego. Dla danej metody i kolumny jest to wartość powtarzalna.
• Integracja powierzchni piku (% Area): Czystość peptydu wylicza się jako stosunek powierzchni piku głównego do sumy powierzchni wszystkich wykrytych pików zanieczyszczeń:
  Czystość (%) = (Powierzchnia piku głównego / Suma powierzchni wszystkich pików) × 100%.
• Standardem laboratoryjnym mr-pep.pl jest czystość ≥99.0%.

2. Spektrometria Mas (MS): Potwierdzenie Tożsamości Cząsteczki

Chromatografia HPLC potwierdza czystość, ale nie dowodzi jednoznacznie tożsamości chemicznej badanej cząsteczki. Do tego służy spektrometria mas (np. electrospray ionization ESI-MS).

W widmie masowym peptydu obserwuje się jony wielokrotnie naładowane [M+nH]n+. Przykładowo dla peptydu o masie cząsteczkowej 4731 Da pik [M+4H]4+ pojawi się w punkcie m/z ≈ 1183.8. Na podstawie dekonwolucji sygnałów wyznacza się dokładną masę cząsteczkową, która musi zgadzać się z masą teoretyczną w granicach błędu pomiarowego (zwykle poniżej ±1 Da).